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實(shí)驗室凈化工程
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PCR實(shí)驗室

pcr實(shí)驗室也叫基因擴增實(shí)驗室,pcr實(shí)驗室有效避免在實(shí)驗過(guò)程中造成試劑、標本、擴增物以及操作人員的交叉污染,保證人員安全及實(shí)驗數據可靠。

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詳情介紹

       pcr實(shí)驗室布局

  要完成一組pcr實(shí)驗,通常需要經(jīng)過(guò)試劑配制、樣品處理、核酸擴增和產(chǎn)物分析4個(gè)實(shí)驗過(guò)程。這4個(gè)實(shí)驗過(guò)程的實(shí)驗用房應相鄰布置,組成一個(gè)獨立的pcr實(shí)驗區。標準的pcr實(shí)驗區包括:試劑準備區、標本制備區、擴增區、產(chǎn)物分析區、各區配套的緩沖區及公共走廊。

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       試劑準備區

  該實(shí)驗區主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。

  試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區,不得經(jīng)過(guò)其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的貯存試劑。

  試劑準備區配備有2~8°C冰箱和-80°C冰箱,計算冷負荷時(shí),需要將它們計算在內。

  房間的面積宜控制在15m2~20m2。本區的壓力梯度要求為:相對正壓狀態(tài),以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入,造成污染。

  標本制備區

  該區域主要進(jìn)行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時(shí)cDNA的合成。

  標本制備區配備有2~8°C冰箱和-20°C冰箱,計算冷負荷時(shí),需要將它們計算在內。在標本制備區,還需要配備生物安全柜,用于進(jìn)行提取核酸的操作。

  為避免提取的核酸在柜內反復循環(huán),造成標本之間的交叉污染,出現假陽(yáng)性結果,該區域配備的生物安全柜必須是B2型的。生物安全柜工作區垂直氣流全部來(lái)自實(shí)驗室,排風(fēng)經(jīng)過(guò)高效過(guò)濾器過(guò)濾后直接排至室外,不允許回到安全柜和實(shí)驗室中。

  根據經(jīng)驗,如果實(shí)驗室內配備生物安全柜,每配備一臺,實(shí)驗室的面積增加10m2;標本制備區的面積宜在25m2~30m2之間。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進(jìn)入本區的氣溶膠污染。

  擴增室

  該區域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來(lái)自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進(jìn) 行。

  在巢式PCR測定中,通常在第一輪擴增后必須打開(kāi)反應管,因此巢式擴增有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區內進(jìn)行。

  擴增室主要配備PCR實(shí)驗室的核心儀器PCR儀,本文實(shí)例中使用了ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。

  在實(shí)驗室建造過(guò)程中,需要給PCR儀配備專(zhuān)門(mén)的UPS電源,以保證其正常工作。該區面積控制在15~20。

  本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應在超凈臺內進(jìn)行。建議采用  5~10Pa壓差,在控制上比較容易實(shí)現。

  產(chǎn)物分析區

  該區域主要進(jìn)行的操作為擴增片段的測定。

  在室內配備通風(fēng)櫥,保證房間內的相對負壓,空氣從室外流向室內。該區面積控制在15㎡~20。

  本區是最主要的擴增產(chǎn)物污染來(lái)源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區擴散至其它區域。建議采用5~10Pa壓差,在控制上比較容易實(shí)現。

  正負壓區域緩沖室的設置

  根據壓力梯度的要求,試劑配制室和樣品處理室為相對正壓,擴增室和產(chǎn)物分析室為相對負壓,要求正壓的區域和要求負壓的區域的緩沖室內的壓力設計大不相同。